Leseprobe
Inhaltsverzeichnis
Zusammenfassung
1 Einleitung
1.1 RNA Welt und die RNA Interferenz
1.2 Strategien zur Nutzung der RNA Interferenz im therapeutischen Ansatz
1.3 Promotoren zur in vivo Transkription von shRNA
1.4 MIDGE® Vektoren und ihr Einsatz als shRNA Matrize
1.5 Reportergene und Biolumineszens
1.6 Zielsetzung dieser Arbeit
2 Material und Methoden
2.1 Material
2.1.1 Geräte
2.1.2 Verbrauchsmaterial
2.1.3 Chemikalien
2.1.4 Enzyme und Reaktionspuffer
2.1.5 Plasmide
2.1.6 Oligodesoxynukleotide (ODN)
2.1.7 MIDGE®
2.1.8 Zusammensetzungen von Lösungen
2.1.9 Säugerzellen CHO-K1
2.1.10 Zellkultur
2.2 Methoden
2.2.1 Molekularbiologie
2.2.1.1 DNA Konzentrationsbestimmung
2.2.1.2 DNA Restriktionsverdau
2.2.1.3 DNA Ligation der einzelnen ODN mit dem Promotor in einem Ansatz
2.2.1.4 Produktgewinnung und -reinigung mit Hilfe der 3‘-5‘ Exonukleaseaktivität der T7 DNA Polymerase
2.2.1.5 DNA Gelextraktion
2.2.2 Zellkultur
2.2.3 Zellzählung und Vitalfärbung mit Trypanblau
2.2.4 Transfektion
2.2.4.1 Lipofektion
2.2.4.2 Elektroporation
2.2.5 Biolumineszenzassay
3 Ergebnisse und Diskussion
3.1 Hybridisierung und Ligation
3.2 T7 Verdau
3.3 Lipofektion
3.4 Elektroporation
3.5 Erklärungsansätze
4 Fazit
5 Abkürzungsverzeichnis
6 Abbildungsverzeichnis
7 Quellen
- Arbeit zitieren
- Carsten Wenzel (Autor:in), 2010, RNA Interferenz durch T-MIDGE® Vektoren, München, GRIN Verlag, https://www.grin.com/document/335214
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